上期小编和大家讲了人类微生物组计划（HMP）是如何进行粪便样本收集的（点击这里），今天小编把人类微生物组计划（HMP）的口腔样本收集方法给大家整理一下，希望对进行口腔微生物研究的您们有所帮助！
   
        1.标准的牙科椅和良好的照明。
        2.检测试剂盒：包括至少一把长柄口镜、牙科探针、手术剪、棉花镊、2 x 2纱布垫、棉卷、棉纱布、木制压舌板。
        3.带螺杆盖（外螺纹）2毫升管子（Mobio）：内含750μL标本采集液体（Mobio缓冲液）。
        4.50毫升的无菌锥形聚丙烯管（Falcon）：用于唾液收集。
        5.预印好的用于收集所有口腔部位的诊所标签。
        6.无菌拭子（Catch-All™,Epicentre Biotechnologies,Madison WI）：用于从软组织面收集样本。
        7.多个无菌迷你Gracey刮匙: 一个刮匙将用于取样，把从指数牙收集的龈上牙菌斑混池；另一个刮匙从同一个指数牙取样，把收集的龈下牙菌斑混池；额外的无菌刮匙作为备用所需。
        8.塑料拉链袋：用于封存收集了标本的Mobio管子。
        9.带有冰块的箱子：用于运送样本到临床实验室进行下一步处理。
   

• 唾液
• 软组织部位
• 硬组织部位

     
1.唾液
        A.受试者被要求让唾液在口腔中至少收集1分钟，然后将口水吐到带有标记的50毫升无菌收集管中（Falcon，带平顶螺盖的无菌锥形管）。为了收集更多的唾液（2-5毫升），这个过程可能需要重复多次。
        B.另外，唾液可以用咀嚼标准块大小的无味口香糖（1.0–1.5g；箭牌）进行刺激。这块口香糖放在受试者的嘴里，受试者被要求先咽下任何累积的唾液，然后按常规规律咀嚼口香糖，一旦在口腔内积累了足够的唾液，将唾液吐到带标记的收集管中。为了收集更多的唾液（2-5毫升），这个过程可能需要重复多次。
       C.将标本收集管放在塑料拉链袋里，放在冰上，在收集标本后4小时内，送到临床实验室做下一步处理。
 
2.软组织部位
        A.所有软组织部位使用Catch-All™无菌拭子进行采样。采样后，每个拭子必须在含有750 μL MoBio 缓冲液的Mobio管子中打旋，拭子海绵应多次压在管壁上，20秒，以确保细菌从拭子转移到缓冲液中。然后将Mobio缓冲液低温（-80度）冷藏，直到下一步处理。
        1)舌背：用拭子刮拭舌头中部1平方厘米的位置，持续5秒。
        2)硬腭：将整个硬腭刮拭10秒。
        3)颊黏膜：刮拭左、右颊粘膜的整个区域，每个区域10秒，当心别碰牙齿。
        4)角质牙龈：刮拭上颌骨前部附着的牙龈10秒。
        5)腭扁桃体：刮拭左、右腭扁桃体各5秒，专注于裂坑。
        6)咽喉：由于咽反射，因此喉部取样很困难，建议在所有其它软组织和硬组织部位取样后，作为最后一个标本取样。让受试者张开嘴，放松舌头，将压板一直插入舌后部，压低舌头。在咽部后方轻轻地刮拭5秒，注意不要刮拭到扁桃体。
 
3.硬组织部位
1)龈上牙菌斑：
        目标是从6个指数牙上采集龈上牙菌斑样本：2个磨牙（# 3和# 19）、2个前磨牙（# 12和# 28）、2个门齿（# 9和 # 25）。
        磨牙：2个磨牙必须被取样：# 3：右上象限的第一个磨牙；# 19：左下象限的第一个磨牙。如果指数第一个磨牙有一个未恢复的近中面，采集这个牙齿样本。如果指数第一磨牙有一个恢复的近中面，而同一个象限的第二个磨牙有一个未恢复的近中面，则采集第2个磨牙样本。如果指数磨牙象限内的所有磨牙都有恢复的近中面，则对指数第一磨牙进行取样。
        前磨牙：2个前磨牙必须被取样：# 12：左上象限的第一个前磨牙；# 28—右下象限的第一个前磨牙。如果指数第一个前磨牙有一个未恢复的近中面，采集这个牙齿样本。如果指数第一前磨牙有一个恢复的近中面，而同一个象限的第二个前磨牙有一个未恢复的近中面，则采集第2个前磨牙样本。如果指数磨牙象限内的所有前磨牙都有恢复的近中面，则对指数第一磨牙进行取样。如果一个前磨牙因为正畸拔牙造成缺失，无论是否近中表面已经修复，都要对残余前磨牙取样。
        门齿：2个门牙必须被取样：# 9：左上象限中门齿；# 25：右下象限中门齿。
        采样步骤：对于牙齿，首先用棉卷将取样部位分离出来，并用来自气-水冲洗器的温和气流进行干燥，接着使用Gracey刮匙尽可能多地刮取被选定指数牙近中面的所有龈上牙菌斑，将刮匙头部浸没在Mobio缓冲液中4-5秒，用收集管内壁擦干净刮匙表面的标本，可以用上述方法重复采集样本，最后将标本收集管放在塑料拉链袋里，放在冰上，在收集标本后4小时内，送到临床实验室做下一步处理。（如果受试者菌斑很少，应对对指数磨牙和前磨牙的配对指数牙进行采样，例如，# 14：左上象限第一磨牙；# 30：右下象限第一磨牙；# 5：右上象限第一前磨牙；# 21：左下象限第一前磨牙，更换Mobio盖子，摇4-5秒，使样本在液体中最大限度地分散）
 
2)龈下牙菌斑：
采样步骤：
        对龈下牙菌斑采集前，同样用棉卷将取样部位分离出来，然后干燥取样部位，并去除任何残留的龈上牙菌斑，接着使用Gracey刮匙尽可能多地刮取被选定指数牙近中面的所有龈下牙菌斑，将刮匙头部浸没在Mobio缓冲液中4-5秒，用收集管内壁擦干净刮匙表面的标本。根据临床判断丢弃有明显出血的标本，如果有出血，不建议对同一部位立即重新采集样本。如果汇集的牙菌斑不够，则按上面描述对配对指数牙齿进行取样。经过上述采样，如果斑块仍然不够，则对第二磨牙近中颊侧龈下牙菌斑进行采样，然后将这些标本与第一次采集的标本合并。后续样本处理及样本保存方式与龈上牙菌斑相同。
 
关于天昊：
       天昊生物采用Miseq PE250测序策略对细菌16S rDNA区/真菌ITS区/真菌18S rDNA区的双V区或多种单V区进行测序，使用低循环数扩增，保证每个样品扩增的循环数统一；采用特殊方法可有效避免系统内误差；数据质量高，有效序列Q30达到80%以上；加上最新升级的分析内容和解释详尽的结题报告，带您享受极致的微生物扩增子测序体验。